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    Brachet反應(yīng)顯示細(xì)胞中DNA和RNA

    發(fā)布時(shí)間: 2023-01-13  點(diǎn)擊次數(shù): 1755次

    簡介

    Brachet 反應(yīng)顯示細(xì)胞中 DNA 和 RNA 是利用了 DNA 和 RNA 這種結(jié)構(gòu)上的差異,采用不同的染料同時(shí)顯示兩者在細(xì)胞中的分布情況。


    原理

    Brachet 反應(yīng)顯示細(xì)胞中 DNA 和 RNA 的基本原理是利用了 DNA 和 RNA 這種結(jié)構(gòu)上的差異,采用不同的染料同時(shí)顯示兩者在細(xì)胞中的分布情況。甲基綠、派洛寧(methyl green,pyronin)為帶有正電荷的堿性染料(結(jié)構(gòu)式見圖3-2),可與帶有負(fù)電荷的核酸分子結(jié)合,兩種染料的作用具有選擇性,甲基綠帶有2 個(gè) 正電荷,易與雙鏈的 DNA 分子結(jié)合,使其顯示藍(lán)綠色;派洛寧帶有1 個(gè) 正電荷,易與單鏈的 RNA 分子結(jié)合,使其顯示紅色。也有人認(rèn)為其染色原理與 DNA 和 RNA 分子的不同聚合程度有關(guān)。細(xì)胞經(jīng)甲基綠-派洛寧混合液處理后,其 DNA 和 RNA 出現(xiàn)不同的顯色反應(yīng),以此可對細(xì)胞中的DNA、RNA進(jìn)行定位、定性和定量分析。

    材料與儀器

    器材:

    尖頭鑷子、染色缸、蓋片、載玻片、吸管、吸水濾紙、普通光學(xué)顯微鏡、CO2 培養(yǎng)箱、 HeLa 人宮頸癌上皮細(xì)胞。


    試劑:
    ①0.01 mol /L PBS(pH 7.2)(36 mL 0.2 mol / L 磷酸氫二鈉液14 mL 0.2 mol /L 磷酸二氫鈉液加雙蒸水至1000 mL 。混勻,待完-全溶解分裝,經(jīng)高壓滅菌后保存于4 ℃ 冰箱備用。)
    ②Carnoy 固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)
    ③甲基綠-派洛寧混合液
    ④蒸餾水
    ⑤丙酮
    ⑥二甲苯
    ⑦中性樹膠

    步驟

    Brachet 反應(yīng)顯示細(xì)胞中 DNA 和 RNA 的基本過程可分為如下幾步:
    A.將培養(yǎng)的 HeLa 細(xì)胞接種于蓋片,24~48 h 后生長為單層。
    B.取細(xì)胞蓋片1 張 ,用 PBS(pH7.2)漂洗3 次 ,吸水濾紙吸去液體。
    C.放入 Carnoy 固定液中固定30 min 。
    D.向蓋片滴加甲基綠-派洛寧混合液,染色30 min 。
    E.蒸餾水輕輕漂洗2~3 次 (每次2~3 s ),濾紙吸去多余水分。
    F.蓋片浸入丙酮中分色2~3 s 。
    G.浸入丙酮-二甲苯(1:1)中5 s 。
    H.浸入純二甲苯中透明5 min 。
    I.滴1 滴 中性樹膠于載玻片上,將蓋片細(xì)胞面朝下封片。
    J.鏡下觀察。


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