最新毛片婷婷99精品视频,久久伊人色AV天堂九九小黄鸭,亚洲色精品AⅤ一区区三区,刺激的乱亲小说43部分阅读

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 制備YAC DNA進(jìn)行Southern印跡分析

    制備YAC DNA進(jìn)行Southern印跡分析

    發(fā)布時(shí)間: 2021-12-24  點(diǎn)擊次數(shù): 950次

    材料與儀器

    酵母菌
    AHC SCE SCEM Tris·Cl EDTA TE 乙酸甲 RNase A 異丙醇 NaCl
    培養(yǎng)箱 離心管 轉(zhuǎn)子

    步驟


    1.  接種一個(gè)紅色的含YAC克隆的酵母菌落于盛有20 ml AHC培養(yǎng)基的250 ml 三角燒瓶中,在旋轉(zhuǎn)搖床上30℃ 250 r/min 振蕩培養(yǎng)24 h。
     
    2.  擴(kuò)大培養(yǎng):取1ml 由步驟1獲得的粉紅色菌懸液接種于盛有100 ml AHC培養(yǎng)基的 1 000 ml三角燒瓶中,于30℃ 250 r/min搖床培養(yǎng)24 h。

    3.  將菌懸液移入2個(gè)50 ml 的錐形離心管中,于2 000 g 離心5 min,棄上清,共用5 ml SCE緩沖液重懸菌體,并合并到一個(gè)試管中。

    4.  加1 ml SCEM緩沖液,在旋轉(zhuǎn)搖床中37℃ 100 r/min 輕搖晃混勻。

    5.  于4℃ 2 000 g 離心棄上清,菌體用5 ml Tris/EDTA裂解液重懸。

    6.  加0.5 ml 10%SDS顛倒混合數(shù)次,于65℃溫育20 min。
     
    7.  加2 ml 冰浴的5 mol/l pH4.8的乙酸甲緩沖液,顛倒混合數(shù)次后置于冰浴60 min。

    8.  于室溫2 000 g 離心10 min,小心將含核酸的上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新管中。加室溫2倍體積的95%乙醇,顛倒混勻。

    9.  于室溫2 000 g 離心5 min,棄上清,在室溫晾干10~15 min,分別加入3 ml TE緩沖液,pH8.0于37℃過(guò)夜溶解核酸。

    10.  加入0.1 ml 的1 mg/ml 無(wú)DNA酶活性的RNase A,于37℃溫育1 h。
     
    11.  加入6 ml 室溫的異丙醇,振蕩并顛倒混勻后用一支毛細(xì)管纏繞起染色體,然后溶于0.5 ml TE緩沖液中。

    12.  加入50 μl 5 mol/l NaCl和2 ml 95%乙醇,顛倒混勻。

    13.  再一次纏繞起染色體DNA,并溶于0.5 ml TE緩沖液中,于4℃保存?zhèn)溆谩?/div> 
    14.  取毎小份2 μg 的YAC DNA和15 μg 用以構(gòu)建YAC文庫(kù)的某物種或個(gè)體的基因組DNA。

    15.  采用幾種高頻切割的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切,接著用單拷貝探針進(jìn)行雜交和核酸印跡分析。
     
    16.   一旦通過(guò)核酸印跡實(shí)驗(yàn)確證YAC克隆,那么可通過(guò)制備染色體凝膠校塊塞和進(jìn)行脈沖電場(chǎng)凝膠電泳,來(lái)明確重組YAC的大小并對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。


    同實(shí)驗(yàn)其他方法

    YAC 克隆的分析實(shí)驗(yàn)

    1.  用接種棒將含重組載體pYAC的AB1380菌株劃線接種在AHC平板上,倒扣平板于30℃培養(yǎng),直至長(zhǎng)出1~3 mm 大小的紅色菌落為止。 2.  短期保存:用Parafilm膜將平

    以上就是本期的內(nèi)容,更多資訊,歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊


    安培生物科技有限公司介紹:

    安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。


產(chǎn)品中心 Products
成人片黄网站色大片免费观看CN| 一边亲着一面膜下奶韩剧免费| 国产女人高潮嗷嗷嗷叫| 欧美高清性色生活片免费观看| 国产精品国产三级国产AV主播| 99久久精品毛片免费播放高潮| 午夜福利理论片在线观看| 国产V亚洲V天堂无码网站| 最近中文字幕国语免费高清6| 人妻用嘴含精大口吞精| 色综合色狠狠天天综合色| 十大免费软件不收费软件| 玩弄白嫩少妇XXXXX性| 人色偷偷色AV噜噜狠狠99| 国产午夜精品一区二区三区| 体育生小鲜肉勃起VIDEOS| 大乳BOOBS巨大吃乳| 色五月丁香五月综合五月4438| 久久久久无码精品国产APP| 色五月丁香五月综合五月4438| 少妇高潮惨叫久久久久久| 岳肥肉紧嫩嫩伦69| 教室停电 挺进她体内H| 国产色无码精品视频免费| 亚洲熟妇色XXXXX欧美老妇| 齐天大性之大闹盘丝洞| 欧洲美熟女乱又伦AV影片| 少妇高潮久久久久久| 久久精品国产亚洲AV嫖农村妇女| 人人爽人人爽人人片AV| 亚洲AV无码有乱码在线观看| 野花日本韩国免费视频6| 久久亚洲精品无码AV| 天天躁日日躁狠狠躁人妻| 少妇把腿扒开让我添69式| 色综合久久久久久久久五月| 黄色电影免费观看| 丰满肥臀大屁股熟妇激情视频| 午夜人妻久久久久久久久| 中文字幕被公侵犯的漂亮人妻| 白丝学生羞涩被弄喘不停视频|